细胞系开发流程酶联免疫吸附试验（ELISA）自问世以来,以其敏感性高,特异性强,操作简便安全,开创了免疫学诊断的新纪元在临床诊断方面得到了广泛的应用.但是ELISA试剂盒在它的研究生产及使用中常常会碰到非特异性显色问题,ELISA试剂盒特异性检验标本中含酶标记物的干扰物,操作不当等因素都会导致这样的结果.本文就在实验过程中产生的一些原因及如何采取一些措施,消除非特异性显色作以分析.

　　实验步骤：

　　使用前应将试剂盒的所有组分和待检样本温度恢复到室温。强烈建议所有的标准品和待检样本进行双复孔测定。

　　1．按前述试剂准备项准备好各种试剂。

　　2．计算检测样本所需酶标条，将酶标条从铝箔袋取出，剩余的酶标条放回铝箔袋中并封好袋口，低温保存。

　　3．洗板：用1×洗涤缓冲液(300μL/孔)洗板三次，拍干酶标板。洗板对试验结果有重要影响，确保最后一次拍板没有洗液残留。

　　4．样本孵育：加入标准品和待测样本，100μL/孔，确保15分钟内完成点样，室温孵育2小时。

　　5．洗板：弃去孔中液体，加入1×洗涤缓冲液(300μL/孔)洗板三次，拍干酶标板。

　　6．酶标检测抗体孵育：将预先配制至工作浓度的检测抗体加入酶标板中，100μL/孔，混匀，室温孵育1小时。

　　7．洗板：弃去孔中液体，加入1×洗涤缓冲液(300μL/孔)洗板三次，拍干酶标板。

　　8．显色：将预先配制的底物液加入酶标板中，200μL/孔，混匀，室温避光孵育20分钟。

　　9．终止：加入50μL/孔终止液至酶标板中，轻轻震动酶标板至显色均匀。

　　10．读值：20分钟内读取450nm的光吸收值。